重组肝素酶Ⅰ热失活动力学模型的建立与应用

发布时间：2015-09-07

【作者】 程咏梅； 陈潮梁； 陈敬华； 刘卫超； 周斌； 宋志新；

工业微生物 , Industrial Microbiology,
2014年02期

【机构】 江南大学药学院； 常山生化药业(江苏)有限公司；

【摘要】 对组氨酸标签肝素酶I（His-Hep I,EC 4.2.2.7）的热失活机制进行了研究。针对短暂低温处理可以使热失活His-Hep I酶活部分恢复及添加二硫苏糖醇（DTr）使其热稳定性提高的现象,利用荧光探针法研究了失活过程His-Hep I构象变化,证明了该酶构象存在可逆转变行为。为进一步明晰His-Hep I的热失活机制,假设该酶热失活的主要途径包括去折叠及形成聚集体,并以此为基础建立模型进行拟合,模型与实验值吻合良好,表明假设的合理性。根据模型计算的活化能为Er=100.217 kJ/mol、Eir=7.857 kJ/mol和Ed=77.062 kJ/mol,此数据从一定程度上解释了冷处理为何能使His—Hep I部分恢复活性。进一步研究表明,任何能够抑制这两种途径发生的措施对于提高His-Hep I热稳定性都是有效的。